【集萃網(wǎng)觀察】說起鈣離子染料，你可能首先想到Fluo-3、Fluo-4，但其實(shí)，除了這兩種最常用的，還有別的。AAT Bioquest旗下著名的熒光染料就有數(shù)十種。 細(xì)胞內(nèi)鈣離子的增加控制了多種細(xì)胞進(jìn)程。而多個(gè)胞內(nèi)來源和質(zhì)膜Ca2+滲透通道參與了鈣離子濃度的改變。此外，檢測(cè)或緩沖這些改變的內(nèi)源蛋白和細(xì)胞器對(duì)鈣離子有著不同的親和力。因此，鈣離子水平變化的量和持續(xù)時(shí)間相差甚遠(yuǎn)，這樣就需要多種檢測(cè)試劑，來觀察這些改變。最適合成像實(shí)驗(yàn)的鈣離子染料取決于您所開展的應(yīng)用和鈣離子濃度改變的性質(zhì)。
選擇時(shí)首先要注意，讓染料親和力與鈣離子水平的預(yù)計(jì)增幅匹配。打個(gè)比方，如果用高親和力染料來檢測(cè)鈣離子的大幅增加，那么染料可能會(huì)變得飽和，導(dǎo)致變化幅度測(cè)得不準(zhǔn)確。相反，親和力低的染料也不能用來檢測(cè)鈣離子的低水平變化。
此外，在選擇特定成像應(yīng)用的染料時(shí)，染料的發(fā)射強(qiáng)度也是必須要考慮的。Fluo染料家族在靜止時(shí)有著極低的發(fā)射，而結(jié)合鈣離子后發(fā)射強(qiáng)度會(huì)大幅增加，這樣就很難分辨靜止的細(xì)胞。Oregon Green® 488 BAPTA染料家族成員有著較高的靜止熒光，因此能用來定位細(xì)胞和結(jié)構(gòu)，但與鈣離子結(jié)合后的發(fā)射強(qiáng)度最大變化較低。 高親和力染料如Fluo-4、Fluo-3和Oregon Green® 488 BAPTA-1及BAPTA-2最適合檢測(cè)低強(qiáng)度刺激的反應(yīng)，其中利用了少量質(zhì)膜或細(xì)胞內(nèi)鈣離子通道。而中等強(qiáng)度的細(xì)胞刺激，如長(zhǎng)時(shí)間利用多個(gè)通道，則最好用中等親和力的染料如Fluo-5F來檢測(cè)。至于高強(qiáng)度刺激，Oregon Green® 488 BAPTA-5N和Fluo-4FF等低親和力染料則最適合。
對(duì)于多重檢測(cè)，您可以選擇紅色的鈣離子染料，這樣與GFP等綠色熒光就不沖突。紅色染料中有高親和力的Rhod-3和X-Rhod-1以及低親和力X-Rhod-5F可供選擇。熒光鈣離子指示劑的乙酰甲酯（AM）衍生物是最常用的活細(xì)胞染料形式。AM衍生物能夠穿過質(zhì)膜，隨后內(nèi)源的酯酶切割A(yù)M基團(tuán)，讓帶電荷的分子困在細(xì)胞內(nèi)。對(duì)于單細(xì)胞成像，不通透的染料形式可通過注射或透析上樣。
百螢生物為科研一線的工作者提供了一種新型的更為有效的鈣流檢測(cè)試劑盒—免洗型Fluo-8鈣流檢測(cè)試劑盒。與其他鈣流檢測(cè)試劑盒相比，該試劑盒更為靈敏和方便，更加適合于高通量藥物篩選。試劑盒內(nèi)所用的Fluo-8是目前最敏感的鈣離子指示劑，其強(qiáng)度是Fluo-4的2倍，F(xiàn)luo-3的4倍。使用該試劑盒進(jìn)行鈣流檢測(cè)時(shí)，可以直接在室溫下進(jìn)行細(xì)胞與染料混合液的孵育，無需洗滌，就可以用讀板機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)而使得鈣流檢測(cè)實(shí)驗(yàn)成為一種簡(jiǎn)單的“混合-測(cè)量”的過程，從而向大家提供了一種更為快速、簡(jiǎn)單、可靠的測(cè)定細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化的方法。
來源：互聯(lián)網(wǎng)
